OTIMIZAÇÃO DE MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE DNA EM MYCOBACTERIUM LEPRAE

Abstract

Embora seja uma doença milenar, a hanseníase ainda é considerada um problema de saúde pública, tendo sua eliminação como meta do Ministério da Saúde. O diagnóstico preconizado pelo Ministério da Saúde é essencialmente clínico. Os métodos auxiliares de diagnóstico atuais, baciloscopia e exame histopatológico, apresentam baixa sensibilidade. Entretanto, o avanço dos ensaios moleculares como PCR ou LAMP, permite a identificação da infecção em indivíduos assintomáticos. Porém, a implantação dessas técnicas para diagnóstico da hanseníase na rotina dos serviços de saúde ainda é um desafio devido ao alto custo. A fim de otimizar metodologias para extração de DNA de M. leprae, avaliando o custo, tempo, quantidade e qualidade do DNA extraído e seu uso na técnica LAMP, foram propostos neste estudo três protocolos, incorporando solução de SDS, proteinase K e Lisozima no protocolo da InstaGene Matrix®. O DNA extraído nas três versões foi satisfatório para realização da LAMP. Entretanto, foi observada diferença estatística nos resultados, sendo 12,48 ng/µL, 13,92 ng/µL e 17,99 ng/ µL nos protocolo 1,2 e 3 respectivamente. Dessa forma, o protocolo 3 foi o indicado por apresentar maior eficiência. Os dados apresentados contribuem para a implantação de técnicas moleculares no serviço de saúde de forma otimizada e eficaz.